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子宫内膜癌组织中黄体生成素及其受体的表达意

来源:论文天下    时间:2014-04-25 16:37  浏览次数:

  作者:陈蕾,白宏伟,尹善德,程鸾,赵军,孙绪德,王蔼明

  【关键词】 促黄体激素;受体,LH;免疫组织化学;子宫内膜肿瘤

  【摘要】 目的: 探讨黄体生成素(LH)及其受体(LHR)在不同分化程度的子宫内膜腺癌组织中的定位及分布. 方法: 采用常规组织学HE染色和免疫组织化学 (SABC)技术检测了子宫内膜腺癌组织15例中LH及LHR表达和分布. 结果: LH及LHR在子宫内膜腺癌组织中的定位基本一致,阳性物质主要位于腺癌细胞的胞膜和胞质,胞核未见阳性物质. 随着分化程度的提高,其免疫反应性物质的着色也逐渐增强,相邻各组间存在统计学差异(P<0.05). 结论: 子宫内膜腺癌细胞既能产生LH,又能表达LHR,与子宫内膜腺癌细胞的分化程度有关.

  【关键词】 促黄体激素;受体,LH;免疫组织化学;子宫内膜肿瘤

  0引言

  黄体生成素 (luteinizing hormone, LH)及其受体(LHR)存在于下丘脑-垂体-腺轴和以外的多种组织,同时在乳腺、前列腺、子宫和卵巢等发生的肿瘤细胞上也有LH的结合位点,从而对其进行功能调节. 子宫内膜癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一,也是一种激素依赖性肿瘤,有研究表明,子宫内膜腺癌组织上有LHR的表达,然而它是否自分泌LH及 LHR的表达与子宫内膜腺癌的分化程度是否相关,尚未见有报道. 我们采用免疫组织化学的方法,研究了不同病理分级的子宫内膜腺癌组织中LH和LHR的表达,旨在了解LH及其受体的表达与子宫内膜腺癌增殖的关系, 为进一步探讨LH在子宫内膜癌发病机制中的作用提供依据.

  1材料和方法

  1.1材料子宫内膜腺癌标本15例来自第四军医大学唐都医院住院患者,其中高中低分化腺癌各5例(HE染色鉴定),选取同期住院的2例子宫内膜增生过长的标本作阳性对照,所有标本用40 g/L甲醛固定24 h,常规石蜡包埋,制备4~6 μm厚的连续切片,并贴附于铬矾明胶的载玻片上. 对每例腺癌组织切片分别用LH抗体和LHR抗体进行免疫组织化学染色. 鼠抗人LH mAb购自美国Santa Cruz 生物试剂公司,工作浓度为1∶1000;兔抗人LHR多克隆抗体和SABC检测试剂盒均购自武汉Boster公司,工作浓度为1∶200;DAB显色试剂盒均为北京中山公司产品.

  1.2方法按武汉Boster公司推荐的SABC染色程序稍加改进,具体步骤为:切片经二甲苯脱蜡,梯度酒精水化,3 mL/L甲醇双氧水孵育30 min以灭活内源性过氧化物酶,10 mmol/L磷酸盐缓冲液(PBS, pH=7.4)振洗5 min×3;滴加20 mL/L的正常羊血清(用10 mmol/L PBS,pH=7.4配制)封闭背景;弃去封闭血清不洗,分别滴加LH单克隆抗体和LHR多克隆抗体,4℃冰箱孵育16 h;PBS洗5 min×3;第二抗体为生物素标记的羊抗兔IgG(1∶200稀释),室温孵育2 h;PBS洗5 min×3;滴加SABC复合物(1∶100稀释)室温孵育1 h; PBS洗5 min×4;DAB显色,复染,脱水,透明,中性树胶封片. 分别用正常羊血清和10 mmol/L PBS取代第一抗体进行孵育作替代对照和空白对照. 采用Q500图象分析系统(美国Leica公司),对不同分化程度的子宫内膜腺癌细胞LH及其受体免疫反应性物质的相对含量进行测定,光镜下每例随机测 10个细胞,每组测50个细胞,并计算出每个细胞LH及其受体免疫反应性物质相对含量.

  统计学分析: 实验结果采用x±s表示,组间比较采用方差分析.

  2结果

  2.1LH及LHR的分布LH及LHR免疫反应阳性产物呈棕褐色细颗粒状,二者在胃癌组织中的定位分布区域基本一致. 对于子宫内膜增生过长,阳性物质主要位于腺细胞的胞质内,细胞核阴性,(图1A,B);对于子宫内膜癌,阳性物质主要位于腺癌细胞的胞质内,细胞核是阴性的,随着分化程度的提高,其免疫反应性物质的着色也逐渐增强,相邻各组间存在统计学差异(P<0.05). 阴性对照实验均为阴性(图2~4).

  图1子宫内膜增生过长LH和LHR表达 略

  2.2LH及LHR免疫反应量LH及LHR的相对含量,随着分化程度的增加而增加的趋势,相邻各组间存在统计学差异(P<0.05,表1).

  图2-图4 略

  表1子宫内膜腺癌细胞LH和LHR免疫反应性物质的含量 (略)

  3讨论

  LH早在1938年首次由HaHtman和Benz报导为腺垂体分泌的一种糖蛋白激素,并在1967年首次被分离成α, β两个亚基. 随着研究的深入,人们发现LH及其受体,既可存在于正常的乳腺、前列腺、颌下腺等组织,又可存在于一些恶性肿瘤组织,并对其功能进行调节.

  我们采用免疫组织化学的方法,发现人子宫内膜腺癌组织中有LH的分布,且LH与 LHR均定位于子宫内膜腺癌细胞的胞质和(或)胞膜,胞核未见阳性信号,二者的分布范围大致相同. 在子宫内膜腺癌细胞中同时检测出LH及其受体,说明子宫内膜腺癌具有自分泌LH的功能,它可能通过局部作用来调节子宫内膜腺癌细胞的功能,当然这还有待于进一步的LH及其受体mRNA的检测来加以证实. 我们的试验结果还显示,人子宫内膜腺癌组织中LH及其受体表达的阳性物质的含量与子宫内膜癌的分化程度有一定的关系. 子宫内膜腺癌分化程度越好,阳性物质的含量越高;反之,分化越差,阳性物质的含量越低. 子宫内膜高分化腺癌的阳性物质含量最高,中分化腺癌次之,低分化腺癌最低,统计学检验差异显著.

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