出国医疗

仓鼠胰腺癌原位模型的建立及生物学特性

来源:论文天下    时间:2013-12-12 16:52  浏览次数:

  仓鼠胰腺癌原位模型的建立及生物学特性

  作者:白纪刚,吕毅,王浩华

  【摘要】目的: 建立仓鼠胰腺癌原位模型,并研究其生物学特性. 方法: 将仓鼠胰腺癌细胞株pGHAM1接种于仓鼠胰腺背膜下,分别于第7, 14, 21, 28日各剖杀10只,肉眼及光学显微镜下观察原位肿瘤的生长、淋巴结转移及肝转移,同时观测腹水量. 结果: 仓鼠胰腺癌原位模型成活率达95%,生长迅速. 接种后第7, 14, 21, 28日原位肿瘤大小分别为(16±6),(173±44),(369±87),(974±226) mm3. 第21日,毛细淋巴管内可见癌细胞团,部分淋巴结有癌细胞转移,可见少量淡血性腹水. 第28日,淋巴结阳性率进一步增加,可见血性腹水,量明显增多;部分仓鼠发生了肝转移. 结论: 仓鼠胰腺癌细胞株 pGHAM1原位模型建立方法简便,易复制,而且肿瘤保持了胰腺癌的生物学特性,是理想的胰腺癌研究模型.

  【关键词】 胰腺肿瘤;疾病模型,动物;金仓鼠

  0引言

  胰腺癌是一种恶性程度高、预后极差的肿瘤. 其原因是胰腺癌发病隐匿,很难早期诊断,而即便早期诊断,部分患者也已经发生肝脏转移、腹膜播散或者局部复发. 基于为胰腺癌研究提供一个肿瘤的试验系统目的,已有大量胰腺癌动物模型建立,但很多是裸鼠模型. 在肿瘤研究方面,由于裸鼠没有正常的免疫系统,其发病机制可能与人有所不同. 而叙利亚金色仓鼠在形态学、生物学以及免疫学等方面与人相似. 我们拟建立仓鼠胰腺癌原位模型,并研究其生物学特性.

  1材料和方法

  1.1材料

  雌性叙利亚金黄仓鼠40只,4~5周龄,纯近交系,体质量40~50 g,购自中国兰州生物制品研究所. 饲养条件:温度(22±3)℃,相对湿度为(40±5)%,光/暗周期为12 h/12 h,按照标准食物喂养,自由饮水;DMEM培养液为Gibcol BRL产品;胎牛血清购自杭州四季青生物工程公司.

  1.2方法

  1.2.1仓鼠胰腺癌细胞株pGHAM1的建立用甲硝二胺诱导叙利亚金黄色仓鼠胰腺导管癌[4]. 肿瘤组织用剪刀剪成1 mm×1 mm×1 mm并用套针植入仓鼠肩胛区皮下,6~8 wk后处死动物,切除肿瘤自治后反复继代种植,第8次种植后切除肿瘤组织,用0.5 g/L的胰蛋白酶消化,37℃下EDTA处理10 min, 1000 r/min离心10 min,收集细胞,于含100 mL/L胎牛血清的DMEM培养液中培养,并加 100 U/L青霉素链霉素,100 mg/L卡那霉素以及100 mg/L两性霉素B,反复传代培养60代,建立pGHAM1细胞株.

  1.2.2仓鼠胰腺癌原位模型的建立PGHAM1细胞株于 DMEM培养液中稳定传代5~6代. 观察细胞增殖旺盛时终止培养,用无血清DMEM培养液制备细胞悬液,调整细胞密度至1×1010/L,备用. 以60 mg/kg腹腔注射戊巴比妥钠,取腹部正中切口,牵出胰腺,于脾门较宽大处胰腺背膜下注射1×106/L PGHAM1细胞悬液后常规关腹. 于术后7, 14, 21, 28 d分别剖杀10只. 切除原位肿瘤,用测径器测量肿瘤大小,按公式V=π/6×长×宽×高计算肿瘤体积,同时观察腹水的质与量、有无淋巴结、大网膜、壁层腹膜及肝脏转移.

  1.2.3病理学检查切除大网膜,平铺在蜡片上,“卷席法”处理大网膜标本;40/L甲醛固定原位肿瘤、壁层腹膜、肝脏及可疑淋巴结,石蜡包埋切片,HE染色,光学显微镜观察.

  2结果

  2.1原位肿瘤及转移情况接种后第7日,可见胰内原发灶大小(16±6) mm3,侵至背膜,10只仓鼠中有5只管状斑处有癌细胞团;壁腹膜镜检显示间皮细胞部分正常(Fig 1A),而部分间隙增宽;肝脏及淋巴结未见转移,无腹水. 第14日,胰腺内原发灶大小(173±44) mm3,侵至背膜;10只仓鼠中9只管状斑处可见癌细胞团,且较原来增大;壁腹膜间皮细胞开始增生脱落(Fig 1B);未检测到淋巴结和肝脏转移,未见腹水. 第21日,肿瘤进一步增大至(369±87) mm3,侵至背膜;有少量淡血性腹水;10只仓鼠管状斑均可见癌细胞团,同时毛细淋巴管中亦可见癌细胞团;壁腹膜间皮细胞大片脱落;10只仓鼠有4只检测到淋巴结转移;肝脏未见转移. 第28日,原位肿瘤大小为(974±226) mm3,与周围脏器或组织粘连(Fig 1C);腹水呈血性,量较大;10只仓鼠有1只死亡,8只检测到淋巴结转移;5只肝脏表面出现大小较一致的多发转移结节.

  2.2病理学特征原位移植瘤呈圆形或椭圆形,表面凹凸不平,外观呈粉红色(Fig 1C),切面呈灰白色,部分中心有坏死,肿瘤组织质地较脆;镜下可见肿瘤细胞呈多角形、梭形或不规则形,胞质淡染,胞核大而圆,异形性明显,核分裂相多见,肿瘤细胞结节状生长,排列成实性巢状,内有小的血窦,无腺腔样结构,与低分化胰腺腺癌一致(Fig 1D). 转移肝脏表面可见多发结节,部分已经发生融合(Fig 1E);镜下可见肝小叶结构遭破坏,取而代之的为癌细胞团,癌细胞特征与胰腺原位肿瘤细胞特征一致(Fig 1F).

温馨提示:如需了解更多重离子质子治疗肿瘤、出国医疗、海外医疗等问题,可拨打:400-067-0509详细咨询。

相关阅读