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HDAC6在食道癌中表达的初步研究

来源:万方数据库    时间:2013-10-29 14:56  浏览次数:
  HDAC6在食道癌中表达的初步研究
  作者:杨晋,赵绍林,杨新玲,辛莎莎,吴惠毅
  摘要:目的分析组蛋白去乙酰化酶6(nDAC6)在食道癌组织中的表达及其l临床意义。方法采用免疫组化SP法,对46例食管癌组织中HDAC6进行免疫组化染色。结果HDAC6在食管癌和癌旁组织中表达率分别为76.09%、8.69%,癌组织中HDAC6主要表达于肿瘤细胞胞浆中。HDAC6的表达与患者性别、年龄、肿瘤大小、浸润程度、病理学分级及淋巴节转移状况无关。结论I-IDAC6在食道癌组织中有显著表达,且其表达主要由肿瘤细胞产生。
  关键词:食道癌;组蛋白去乙酰化酶6;免疫组化
  组蛋白的乙酰化和去乙酰化是基因表达过程中重要的调控方式,是转录过程中的关键修饰。组蛋白乙酰化状态取决于组蛋白乙酰基转移酶(HATs)与组蛋白去乙酰化酶(HDACs)之间的活性竞争。研究证实HDACs在多种肿瘤中呈高表达,且与肿瘤的发生发展密切相关。HDAC6为目前HDAC家族中研究最广泛的一类亚型,现已证明在乳腺癌、口腔癌、肺癌等多种肿瘤中有表达,但国内外尚无 HDAC6在食道癌中表达情况的报道较少。本文通过免疫组化方法检测食管鳞癌组织中HDAC6的表达,探讨其与食管鳞癌生物学行为之间的关系。
  l材料与方法
  1.1临床资料选取2005—2007年本院心胸外科手术切除后,经病理诊断为食管鳞状细胞癌及癌旁组织46例。男34例、女12例,年龄43—75岁,平均 60岁。病理分级:高分化10例,中分化28例,低分化8例。所有患者术前均未接受放疗或化疗。
  1.2标本取材和固定标本按常规固定进行免疫组化石蜡切片。
  1.3实验试剂及仪器小鼠抗人HDAC6单克隆抗体,购自美国Santa cnlz公司。小鼠sP检测试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。Olympus BXS0显微镜,Leica RM2265石蜡切片机。
  1.4免疫组化SP法检测按试剂盒说明书进行操作。DAB光镜下控制染色3—5分钟;苏木素复染; lO g/l盐酸酒精分化;干燥后中性树胶封固。以PBS 代替一抗作为阴性对照。
  1.5结果判定标准阳性:细胞质呈棕黄或棕褐色为阳性细胞。依据阳性细胞数评分,阳性细胞数:无阳性细胞为一,阳性细胞l%-25%为+,阳性细胞25%-50%为++,阳性细胞>50%为+++。计数方法:结果判定采双盲法,每张切片由两名病理医师分别判断,两者不一致时重新计数。
  1.6统计学分析数据应用SPSSll.5软件进行处理。计数资料用X2检验,以P<0.05为有显著性差异。
  2结果
  2.1 HDAOi的表达情况46例食管癌组织中,有 35例HDAC6表达阳性,阳性率76.09%;46例食管癌旁组织有4例HDAC6阳性,阳性率8.69%。 HDAC6的表达在食管癌组织显著高于相应癌旁组织(P<O.01)。见图1、2、3、4。
  2.2 HDAC6的表达与食道癌临床病理参数相关性分析HDAC6在食道鳞癌组织中阳性表达,与患者年龄、性别、肿瘤大小、浸润程度、病理学分级及淋巴节转移无关。见表1。
  3讨论
  随着肿瘤生物学研究的不断进展,人们认识到遗传学和表遗传学改变引起癌基因活化和抑癌基因失活是肿瘤发生的核心生物学进程。表遗传学指的是表型发生改变而基因型未发生变化,是一种对肿瘤发生有莺要作用的可遗传的基因表达模式。主要包括DNA甲基化改变和染色质组蛋白修饰。组蛋白修饰包括甲基化、乙酰化、磷酸化、泛素化等。组蛋白的乙酰化和去乙酰化主要通过以下三种方式影响基因的表达:一是组蛋白乙酰化和去乙酰化改变核小体周围环境,加强或削弱基因表达相关蛋白质与DNA的相互作用;二是组蛋白乙酰化和去乙酰化参与染色质构型改变,进而影响蛋白质与蛋白质、蛋白质与DNA的相互作用;三是组蛋白乙酰化和去乙酰化作为特殊信号,被其他蛋白质因子识别并影响它们的活动,从而实现对基因表达的调控。
  大量实验表明,在肿瘤发生发展过程中存在组蛋白乙酰化和去乙酰化水平和模式的紊乱,而在此过程中HDAC起着重要的作用。HDAC6为HDAC 家族中研究最广泛的一类亚型。HDAC6在体内主要分布在细胞胞浆、核周结构和细胞的生长前沿区,在心、肝、肾、胰等结构中高表达。到目前研究认为HDAC6可能通过以下几种途径参与肿瘤的发生和进展:一是通过与泛素结合保持去乙酰基的活性,进而使染色质浓集,使其降低甚至失去转录活性,干扰体内正常基因转录与蛋白质表达;二是通过微管去乙酰化和HSP90去乙酰化调控基因转录,改变细胞的运动能力从而参与肿瘤发生进展和肿瘤转移以及肿瘤血管的生成;三是通过与一些转录抑制因子在抑癌基因启动子区域异常的相互作用,造成抑癌基因表达沉默,从而参与一些肿瘤的发生、发展。

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