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肿瘤浸润淋巴细胞在人黑色素瘤组织中的形态学

来源:论文天下    时间:2013-08-27 16:02  浏览次数:

  肿瘤浸润淋巴细胞在人黑色素瘤组织中的形态学观察

  作者:谢遵江,贺业春,贾立敏,刘 颖,刘 丽,郑金华

  【摘要】 目的 探讨人黑色素瘤组织中肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocyte,TIL)的形态学特征。方法 采用光镜、透射电镜和免疫组化方法观察9例人皮肤黑色素瘤组织中TIL的分布及形态变化。结果 肿瘤浸润淋巴细胞主要分布在癌周区,病变早期,TIL数量多、集中分布;病变晚期,TIL数量少、散在分布。病变早期TIL数量明显高于病变晚期(P<0.01)。电镜下,可见肿瘤浸润淋巴细胞核大,胞质少,核较圆。TIL与肿瘤细胞有接触。结论 本试验提示黑色素瘤组织中TIL数量多少与肿瘤的进展有关。TIL与肿瘤细胞关系密切。

  【关键词】 黑色素瘤;肿瘤浸润淋巴细胞;形态学

  肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocyte,TIL)是以T细胞为主的一个异质性淋巴细胞群体。有关TIL的研究多集中在肿瘤生物学治疗方面,以及在肿瘤组织中的浸润程度对肿瘤病人生存预后影响的研究[1],但对有关TIL的形态学研究较少。本文通过CD3在黑色素瘤组织中的表达和电镜方法对人黑色素瘤组织中浸润淋巴细胞的形态进行研究,为研究TIL的功能提供形态学基础。

  1 材料与方法

  1.1 试验材料 人黑色素瘤标本9例,取自早晚期不同的病变阶段的手术病人。由哈尔滨医科大学附属第一、第二医院提供。根据临床表现和病理特征及临床病理诊断,将黑色素瘤分为病变早期(5例)和病变晚期(4例)两部分。

  1.2 取材方法 根据病人病情(早、晚期),临床手术切取黑色素瘤新鲜组织标本,当即以双馏水清洗,再以0.2mol/L磷酸缓冲液冲洗,取黑色素瘤组织,一部分经10%福尔马林液固定,制成石蜡切片,HE染色;另一部分经3%戊二醛固定,电镜样品制备,光镜和电镜观察。

  1.3 免疫组织化学方法 黑色素瘤周组织经4%福尔马林液固定后,制成4μm石蜡切片。切片经脱蜡后用PBS漂洗,一抗采用兔抗人CD3抗体(武汉博士德生物工程有限公司),二抗采用山羊抗兔IgG SABC试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司),按使用说明书程序操作。

  1.4 常规透射电镜观察 常规透射电镜样品制备,透射电镜观察。

  1.5 统计学方法 对病变早期和晚期CD3免疫组化染色切片进行观察,选择CD3阳性细胞最多处,观察5个高倍视野(×40)进行阳性细胞计数,并进行统计学处理。

  2 结果

  2.1 免疫组化(CD3)观察 每例标本均可见CD3 阳性细胞,主要分布在乳头层和癌周围及癌巢内。CD3表达在T淋巴细胞上。被染成棕黄色的TIL呈圆形,胞浆少,核大,其分布均匀、密集。在病变早期,TIL数量多,以集中分布为主。病变晚期,TIL数量少,多数散在分布,少数呈集中分布。通过在病变早期(72.31±5.64)和晚期(23.72±4.53)TIL数量的比较,两者之间差异有非常显著性,P<0.01。

  2.2 透射电镜观察 癌早期,TIL分布范围广,数量多,聚集成堆。TIL形态不规则,但大体可分成两种:一种具有一般淋巴细胞的典型构造,核大,异染色质致密呈块状,核型较圆,胞浆少,除游离核糖体、线粒体外,其他细胞器较少;另一种TIL核呈圆形,或一侧凹陷成肾形及不规则形,胞浆较多,内有丰富内质网、溶酶体、线粒体及颗粒,呈活化状态,趋于浆细胞化。TIL还彼此接触。TIL呈环状包绕癌细胞,且TIL与癌细胞密切接触。

  癌晚期,可见到淋巴细胞与肿瘤细胞融合,TIL进入癌细胞内,无膜结构,细胞核靠近,癌细胞线粒体肿胀。活化的TIL变形与癌细胞接触,并可见淋巴细胞形成,环绕癌细胞。

  3 讨论

  近年来国内许多学者从免疫学角度对TIL在肿瘤的浸润、进展和预后等方面进行了大量研究,但迄今为止有关黑色素瘤中TIL形态学特征方面尚缺详细报道。本文采用光镜、免疫组化和透射电镜的方法对黑色素瘤中TIL形态分布特征进行观察,以探讨TIL在肿瘤免疫中的作用。

  TIL是以T淋巴细胞为主的一群异质性淋巴细胞群体。笔者[2,3]曾研究报道了上皮组织内和集合淋巴小结内的淋巴细胞形态并印证淋巴细胞在机体免疫中起重要作用。本文观察到TIL与肿瘤免疫关系密切,这些细胞主要分布在肿瘤交界处,其次是癌周组织。本文认为:TIL在癌周组织的存在,限制肿瘤生长,使肿瘤局限化,可视为机体的第一道防线;TIL在癌交界区的存在,促成机体免疫反应,防止肿瘤的扩散,可称为第二道防线。TIL浸润代表了机体对肿瘤的抵抗反应,体现在对癌细胞的直接杀伤,其杀伤作用主要是通过细胞毒T细胞(CTL)实现的。CTL通过穿孔素间接杀伤途径和Fas配体途径,使癌细胞坏死、溶解和凋亡。TIL浸润多少,影响和决定着肿瘤的侵袭、转移和预后[4]。

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