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染料木黄酮对卵巢癌HO

来源:论文天下    时间:2013-11-13 15:45  浏览次数:

  染料木黄酮对卵巢癌HO

  作者:王心,辛晓燕,黄艳红

  【摘要】目的: 观察植物雌激素染料木黄酮(GEN)与顺铂(DDP)联合应用治疗人卵巢癌裸鼠移植瘤的效应及其机制. 方法: 建立20只人卵巢癌裸鼠移植瘤模型,随机分成4组,分别为对照组、GEN组、DDP组及GEN+DDP组. 4 wk后处死裸鼠,计算抑瘤率,用Ⅷ因子抗原多克隆抗体测定肿瘤内微血管密度(MVD),用细胞增殖指数(PI)反映细胞增殖状态,并进行形态学观察. 结果: DDP组及GEN组均可有效抑制卵巢癌移植瘤生长,二者联合应用有协同作用. GEN+DDP组MVD和PI低于GEN组和DDP组(P<0.01),3组均显著低于对照组(P<0.01). 形态学观察可见GEN组和GEN+DDP组细胞凋亡、凋亡小体及变性坏死增多,而对照组少见. 结论: GEN对人卵巢癌HO8910PM细胞裸鼠移植瘤有明显抑制作用,且与DDP有协同作用;GEN对肿瘤细胞的作用,与抑制肿瘤细胞的增殖和肿瘤区新生血管的生长、阻断肿瘤血供有关.

  【关键词】 卵巢肿瘤;染料木黄酮;顺铂;新生血管化,病理性;增殖细胞核抗原

  0引言

  卵巢癌是妇科常见的恶性肿瘤,其死亡率居妇科恶性肿瘤之首. 重金属化疗药顺铂(cisplatin, DDP)是治疗卵巢癌最有效的药物之一,但因其毒副作用明显,很多患者不能耐受,使其应用受限. 染料木黄酮(genistein, GEN)是植物雌激素的一种,体内外研究表明GEN对乳腺癌、前列腺癌和结肠癌细胞有明显抑制作用[1-3]. 目前关于GEN对卵巢癌的体内研究甚少. 本研究以HO8910PM细胞株构建人卵巢癌裸鼠移植瘤模型,观察GEN及其与DDP的联合应用对卵巢癌的作用,并对其机制进行评价,为GEN的开发和提高卵巢癌临床治疗疗效提供新的思路.

  1材料和方法

  1.1材料

  人卵巢癌细胞株HO8910PM由第四军医大学妇产科实验室提供;Balb/c遗传背景的先天性细胞免疫缺陷动物,nu/nu裸小鼠,雌性,鼠龄4~6 wk,体质量18~21 g,购自上海斯莱克实验动物有限责任公司[许可证号:SCXK(沪)20030003],饲养于第四军医大学实验动物中心SPF级环境[许可证号:SYXK(军)2002023]. DDP为山东齐鲁制药厂生产,生产批号0412149;GEN为第四军医大学药物研究所产品,批号: 20041225;兔抗人Ⅷ因子相关抗原(factor Ⅷ related antigen)多克隆抗体、小鼠抗人增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)单克隆抗体及SP免疫组化试剂盒,购自北京中杉金桥生物公司.

  1.2方法

  1.2.1动物模型的建立卵巢癌细胞株HO8910PM,常规方法复苏,接种于含150 mL/L小牛血清的RPMI 1640培养液中,置于37℃, 50 mL/L CO2饱和湿度培养箱内,大量扩增细胞. 将处于对数生长期的细胞制成 2×107/mL悬液,注入裸鼠后背部皮下. 穿刺点距注射部位1.2 cm,每只裸鼠皮下接种1点,每点 0.2 mL,含4×106个细胞.

  1.2.2治疗待移植瘤直径长成4 mm左右时(约接种后7 d),采用随机数字法将20只裸鼠随机分成4组,每组5只. GEN组灌胃给予GEN 50 mg/kg・d,共30 d;DDP组腹腔注射DDP 5mg/kg・d,实验开始连续用1 wk后停药;GEN+DDP组给予GEN及DDP,给药方法及途径同上;对照组每日灌胃给予去离子水. 每只裸鼠灌胃或腹腔注射剂量为0.2 mL/次.

  1.2.3观察指标GEN治疗30 d后,脱颈处死各组裸鼠,称体质量,解剖裸鼠. 取移植瘤称质量,计算各组平均瘤质量及抑瘤率(IR),IR=(1-治疗组平均瘤质量/对照组平均瘤质量)×100%. 按金正均法计算q值来评价GEN与DDP两药合用的效果,q=(EA+B)/[EA+(1-EA)×EB], EA+B为两药合用时的抑瘤率,EA 和EB为各药单独应用时的抑瘤率. q<0.85表示两药有拮抗作用,0.85≤q≤1.15表示两药有相加作用,q>1.15 表示两药有协同作用. 各组裸鼠心、肝、脾、肺、肾等重要脏器及移植瘤,用40 g/L中性甲醛溶液固定,常规石蜡包埋、切片. HE染色,光镜下观察. SP免疫组化按试剂盒说明进行操作,Ⅷ因子相关抗原抗体或PCNA抗体的工作浓度均为1∶100. Ⅷ因子只在血管内皮细胞表达,任何一个胞质呈棕染色的内皮细胞或内皮细胞簇,与周围其他组织有明显界限,无论有无管腔,定义为一个血管. 在低倍镜(100倍)下选定移植瘤内血管密度最高的5个区域,再在高倍镜(200倍)下计数每个视野的血管条数,以平均值为该移植瘤的微血管密度(microvessel density, MVD)[4]. PCNA定位于细胞核上,阳性染色为棕黄色. 先在低倍镜(100倍)下选择染色阳性的高密度区域,再换高倍镜(200倍)观察,至少计数500个肿瘤细胞,其中阳性细胞所占百分比即为PCNA标记指数(PCNA labelling index, PI).

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