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卵巢癌患者术前、术后、复发及化疗过程中血清

来源:万方数据库    时间:2013-08-07 11:19  浏览次数:
  卵巢癌患者术前、术后、复发及化疗过程中血清蛋白质差异表达研究
  作者:赵晋,汤泓,李红霞
  摘要:目的 探讨卵巢癌患者术前、术后复发及化疗过程中血清蛋白质的变化。方法 采用表面增强激光解析/离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)联合CM10蛋白质芯片技术,对就诊于我院并进行手术治疗及术后化疗的9例卵巢癌患者进行跟踪随访收集到的37份血清标本进行检测。结果 共获得显著差异表达的蛋白峰7个。1.在卵巢癌术前、术后自身对照研究中,卵巢癌术前组蛋白峰平均强度/卵巢癌术后组蛋白峰平均强度≥2的蛋白峰有1个(1452.58Da),说明该蛋白峰在卵巢癌术前组中高表达。卵巢癌术前组蛋白峰平均强度/卵巢癌术后组蛋白峰平均强度≤0.5的蛋白峰有4个(8785.20,1659.79Da,4253.91Da,5603.31Da),其中m/z为8785.20的蛋白峰与ApoC-Ⅲ 的质核比相符。说明该蛋白峰在卵巢癌术前组中低表达。2.在卵巢癌术前、术后及复发组对照研究中,差异表达明显的蛋白峰有2个,其中m/z7991.89Da的蛋白峰术前、术后及复发时的蛋白质平均强度分别为14.67、5.75、12.28(P值=0.002);m/z8093.54Da的蛋白峰术前、术后及复发时的蛋白质平均强度分别为3.12、0.71、2.81(P 值=0.002)。结论 7个差异表达峰与卵巢癌发生、发展相关,有望成为有价值的卵巢癌的诊断尤其卵巢癌术后及复发的监测的标志物。
  关键词:卵巢癌;SELDI-TOF-MS;质谱;蛋白质组学
  卵巢癌是一种多因素、多基因参与的复杂疾病。随着人类基因组计划的完成,人们更加清楚地认识到:基因组是一个静态的信息源,它具有确定的基因内容,即无论细胞类型或环境条件如何,除极少数情况外,它总是维持不变。因此,基因间的功能关系必须在转录和蛋白质组水平上加以研究。蛋白质组(proteomics)是在一定条件下由一个特定的细胞或生物体产生的所有蛋白质。细胞通过调控其蛋白质的表达水平和活性来适应内外环境的改变,所以,蛋白质组无论是在质或量上的改变都反映了处于功能活动中的细胞的一种状况。因此用蛋白质组学方法从整体水平上研究肿瘤的发病机制,寻找肿瘤诊断和预后的特异性标志物,以及药物治疗的靶标等均已成为近期研究的热点。
  本研究采用最常用的一种蛋白指纹图谱技术———表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SEL-DI-TOF-MS),对就诊于我院并进行手术治疗及术后化疗的9例卵巢癌患者进行了跟踪随访,共收集到37份血清标本。对上述标本分别进行了蛋白质谱分析,观察卵巢癌患者术前、术后、复发及化疗过程中血清蛋白质变化,探讨卵巢癌发生、发展及复发过程中血清质谱多肽蛋白图谱变化,旨在筛选新的与卵巢癌发生、发展与复发密切相关的蛋白质或多肽,为临床诊断卵巢癌提供可能的血清肿瘤标志分子。
  1 材料和方法
  1.1 研究对象
  所有血清标本均取自北京世纪坛医院妇科初诊卵巢癌患者。7例卵巢癌患者的年龄为40-69岁,平均52.8岁。均为浆液性腺癌。均收集术前(7份)、术后(不同时间22份)血清标本。其中复发患者3例,包括复发后(不同时间8份)血清标本。血清标本总数共37份。按2000年国际妇产科联盟(FIGO)手术病理分期,Ⅰ期1例,Ⅱ期3例,Ⅲ期5例。术式均采用肿瘤细胞减灭术,均在术后2周内开始接受正规化疗,采用化疗方案为Pt(顺铂+紫杉醇)或PC(顺铂+环磷酰胺)。所有患者的组织标本均经术后病理证实。
  1.2 主要试剂与仪器
  尿素(urea)、乙腈(CAN)、3-环乙胺-1-丙磺酸(CHAPS)、三氟乙酸(TFA)、芥子酸(SPA)均购自Sigma公司;SELDI质谱仪及CM10弱阳离子芯片购自于美国BIORAD公司。
  1.3 试验方法
  1.3.1 样品的收集与血清样本制备 将采集的静脉血4℃静置2h后离心(4000rpm,10min),取上清液按100μl/管分装,置于-80℃冰箱中保存,冻存前在标本管上详细标号。-80℃冰箱中取出血清样品,置冰盒上融解;以10,000rpm,4℃离心2min;每个样品取10μl分别置于1.5ml离心管中,加20μlU9缓冲液稀释,充分混匀;将以上样品冰浴振荡30min(或每隔5min用手指轻弹混匀一次)。将30μl上述变性后样品加入370μl相应的结合缓冲液,使得血清的总稀释倍数达到40倍。混匀,避免气泡产生
  1.3.2 SELDI-TOF-MS检测 取出CM10的芯片,在芯片背后标记时间,芯片种类,操作者的姓名等资料。将芯片装入生物芯片处理器。每孔加入200μl结合缓冲液(50mMNaAC,pH4.0),置振荡器400-600rpm/min震荡5min,甩掉缓冲液。重复上述操作一次。在芯片处理器每孔中加入100μl处理好的样品,置振荡器400-600转/min,4℃震荡1h。甩出样品,重复操作一次。每孔加入200μlHPLC水,立刻甩出。立刻拆开芯片处理器,取出芯片后,待干后,在每个加样孔上加SPA0.5μl,待干后,重复加SPA0.5μl一次。待干后,即可上机测定。

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