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PTTG、VEGFC 的表达及微淋巴管密度与非小细胞肺癌

来源:论文天下    时间:2014-01-08 12:50  浏览次数:

 

  PTTG、VEGFC 的表达及微淋巴管密度与非小细胞肺癌临床病理特征的关系

  作者:尹秋伟 郭旭峰 胡国强 赵健 李希波

  【摘要】 目的 检测非小细胞肺癌(nonsmall cell lung cancer,NSCLC)、癌旁组织及肺良性病变组织中垂体瘤转化基因(pituitary tumor transforming gene,PTTG)及血管内皮生长因子C(vascular endothelial growth factor,VEGFC)的表达和微淋巴管密度(lymphatic microvessel density,LMVD)值,并探讨三者间的相互关系。方法 应用实时荧光定量 PCR 和免疫组织化学方法检测非小细胞肺癌组织中 PTTG、VEGFC mRNA 和蛋白及 LMVD 的表达,分析 PTTG、VEGFC 及 LMVD 与 NSCLC 临床病理特征的关系,以及 PTTG、VEGFC 和 LMVD 三者之间的相互关系。同时,对随访资料进行生存分析,绘制生存率曲线,探讨 PTTG、VEGFC 对肺癌患者预后的影响。结果 PTTG、VEGFC mRNA 和 LMVD 值在不同性质的肺病变组织中的表达均有显著性差异(P均<005),在不同年龄、性别、是否吸烟、肿瘤大小、组织学类型及分化程度间无显著性差异(P均>005),在TNM分期、淋巴结转移与否及预后组间有显著性差异(P均<005)。PTTG、VEGFC 蛋白表达在淋巴结转移与否及预后组间有显著性差异(P均<005)。生存率曲线显示 PTTG、VEGFC 高表达者生存时间均短于低/无表达者(P=0030,0027,n=65)。PTTG 在肺癌组织中的表达与 VEGFC、LMVD 密切相关,随着 PTTG 强度增加,VEGFC 分级及 LMVD 值亦增加。结论 PTTG、VEGFC 的过度表达促使肿瘤微淋巴管的生成,进而促进了肿瘤细胞淋巴结转移。PTTG 和 VEGFC 表达可作为判断 NSCLC 生物学行为及肺癌患者预后的良好指标,VEGFC 有望成为肺癌抗淋巴管治疗的新靶点。

  【关键词】 垂体瘤转化基因;血管内皮生长因子C;微淋巴管密度;实时荧光定量PCR

  垂体瘤转化基因(PTTG)是1997年〔1〕 被发现并证实与细胞增殖、分化和凋亡有关的癌基因。血管内皮生长因子(VEGF)C 被认为是迄今发现的唯一特异性新生淋巴管刺激因子,可促进肿瘤微淋巴管生成及肿瘤细胞向区域淋巴结转移。有研究〔2〕 显示 PTTG 可通过促进 VEGFC 的过度表达,促使肿瘤细胞发生淋巴结转移。国内外已报道 PTTG 在食管癌、胃癌和卵巢癌等多种肿瘤中高表达,但目前尚未见对 PTTG 在肺癌中表达研究的报道。以往关于 VEGFC 的研究多为蛋白半定量分析,本实验结合免疫组化应用实时荧光定量 PCR 对非小细胞肺癌(NSCLC)组织中 PTTG、VEGFC 的表达进行精确定量分析,并检测微淋巴管密度(LMVD)的表达情况,旨在探讨它们与 NSCLC 临床病理特征及预后的关系。

  1 材料与方法

  11 研究对象

  收集65例 NSCLC 组织,均来自手术切除且经病理科常规病理学检查证实。男∶女为40∶25,年龄43~78(中位数588)岁。依据1997年新的修订标准进行TNM分期,其中Ⅰ期7例,Ⅱ期28例,Ⅲ期26例,Ⅳ期4例;按病理形态学分为鳞状细胞癌36例,腺癌26例,大细胞癌3例;按分化程度分为高分化5例,中分化18例,低分化42例;按有无淋巴结转移分为有淋巴结转移37例,无淋巴结转移28例。所有患者均为原发性 NSCLC,术前均未接受过化疗或放疗等任何治疗。同时取65例配对的癌旁组织和20例肺良性瘤样病变组织(包括结核球10例,错构瘤4例,炎性假瘤4例,肺纤维组织细胞瘤1例,肺隐球菌感染1例)。癌旁组织为距肿块边缘5 cm以上的正常组织。肺癌组织和肺良性病变组织均取自肿块中央非坏死部分。标本经10%甲醛固定,常规脱水,石蜡包埋。65例患者无住院期间死亡,随访日期以患者手术日期起计算,术后随访至2006年5月。

  12 实验用品

  RNAiso Reagent、SYBR ExScriptTM RTPCR Kit(DRR053S) 均购自TaKaRa公司,引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成,其他各种化学试剂均为进口或国产分析纯。采用ABI PRISM 7000 实时 PCR扩增仪。兔抗人多克隆抗体 PTTG、VEGFC、VEGFR3及免疫组织化学试剂盒PV9000均购自北京中山生物技术公司。

  13 实验方法

  131 实时荧光定量

  1311 总RNA的提取

  每100 mg组织匀浆后,加入TRIzol Reagent 1 ml,然后加入02 ml氯仿,离心后吸取上清,加入05 ml异丙醇,离心沉淀后弃上清,75% 乙醇洗沉淀,DNase Ⅰ酶解可能残余的基因组DNA。RNA 溶于DEPC 水,甲醛变性凝胶电泳,分光光度计检测浓度和纯度。

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